細胞實驗常見問題（二）
A.答(dá)案
-80℃分(fēn)裝(zhuāng)儲存，凍融一次損失10 % ，應避免反複凍融。保存6-12個月以上的樣品，進行試驗前，重新(xīn)測一次滴度。病毒産(chǎn)品解凍後最好保持在冰格中(zhōng)，并盡快使用(yòng)。如果解凍後的病毒一時用(yòng)不完，滴度足夠高時，4 ℃可(kě)保存1-2周。但應盡快使用(yòng)，一般4 ℃放置一周，滴度會有(yǒu)4-5倍的下降。
A.答(dá)案
可(kě)适當稀釋，在實驗過程中(zhōng)稀釋病毒的等滲溶液沒有(yǒu)其他(tā)特殊要求，常規的動物(wù)實驗用(yòng)PBS、生理(lǐ)鹽水等即可(kě)。稀釋後的樣品盡量一次性用(yòng)完。
A.答(dá)案
AAV包裝(zhuāng)能(néng)力可(kě)以達到4.9 kb。兩端ITR200-300 bp，外源基因插在兩個ITR之間，随着插入外源基因的變大， AAV的包裝(zhuāng)能(néng)力将降低。
A.答(dá)案
野生型AAV不能(néng)獨立存在，需在輔助病毒如腺病毒、單純癟彥病毒存在的條件下，才能(néng)在感染的宿主細胞中(zhōng)複制合成裝(zhuāng)配蛋白，産(chǎn)生新(xīn)的病毒顆粒。重組AAV載體(tǐ)(rAAV）的制備llPAAV的rep.及cap基因由外源基因表達框替代，而隻保留了兩端的ITR序列，在生産(chǎn)rAAV時，需要提供Rep和Cap蛋白的反式功能(néng)以及其他(tā)輔助病毒的輔助功能(néng)，帶有(yǒu)外源基因的重組AAY基因組才會被營救、複制并包裝(zhuāng)成rAAV病毒。
A.答(dá)案
慢病毒對分(fēn)裂細胞和非分(fēn)裂細胞均有(yǒu)感染能(néng)力，整合至細胞基因組并長(cháng)期穩定表達，體(tǐ)内和體(tǐ)外實驗皆可(kě)用(yòng)。
A.答(dá)案
病毒液超過1 mL時，-80 ℃取出後可(kě)37 ℃水浴解凍；100-1000微升之間可(kě)室溫解凍；小(xiǎo)于100微升可(kě)在4 ℃冰上解凍，實驗前5 min冰上取出，恢複至室溫。使用(yòng)PBS緩沖液或培養目的細胞無血清培養基稀釋病毒，混勻分(fēn)裝(zhuāng)後使用(yòng)。稀釋後的樣品盡量一次用(yòng)完。
