一抗的類别亞型

二抗需與一抗的類别或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體(tǐ)而言。多(duō)克隆抗體(tǐ)主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應的二抗就是抗IgG抗體(tǐ)。其中(zhōng)單克隆抗體(tǐ)的類别及亞類通常會在産(chǎn)品說明書中(zhōng)都會有(yǒu)描述，如果你的一抗是小(xiǎo)鼠IgM，那麽相應的二抗就應當是抗小(xiǎo)鼠IgM。

如果單克隆一抗是小(xiǎo)鼠IgG的某一亞類（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那麽幾乎所有(yǒu)的抗小(xiǎo)鼠IgG都可(kě)以與之結合，或者你也可(kě)以選擇專門針對這一亞類的二抗，例如，如果你的一抗是小(xiǎo)鼠IgG1，那麽你可(kě)以選擇抗IgG1的二抗，此種抗體(tǐ)在雙标記實驗中(zhōng)尤其适合。在不清楚一抗為(wèi)何種類/亞類的情況下，可(kě)以選用(yòng)抗相應物(wù)種IgG。

.二抗的耦聯标記

一般來講，耦聯到二抗上的探針主要有(yǒu)酶（辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物(wù)APAAP，PAP），熒光基團（FITC、 Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight等）、生物(wù)素、金顆粒。選用(yòng)哪種探針的二抗主要取決于具(jù)體(tǐ)的實驗。對于Western Blot和ELISA，最常用(yòng)的二抗是酶标二抗；而細胞或組織标記實驗（細胞免疫化學(xué)，組織免疫化學(xué)，流式細胞術）中(zhōng)通常使用(yòng)熒光基團标記的二抗，免疫組化中(zhōng)也可(kě)以使用(yòng)辣根過氧化酶或堿性磷酸酶标記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測信号，可(kě)以使用(yòng)Biotin/Avidin檢測系統。在一些熒光檢測方案中(zhōng)，則需要選擇不同的熒光标記；而金顆粒标記的二抗則更多(duō)的應用(yòng)于免疫電(diàn)鏡中(zhōng)。

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Anti-IgG還是Anti-IgG, F（ab’）2 fragment

在一些如胸腺、脾髒、血液的組織以及造血細胞、淋巴細胞、B細胞等細胞内，通常含有(yǒu)較多(duō)的Fc受體(tǐ)，這時候選擇二抗時最好選擇Anti-IgG, F（ab’）2 fragment這樣的特異性二抗，這樣就消除了由于Fc部分(fēn)與IgG的非特異性結合。

常規的Anti-IgG （H+L）二抗與IgG的重鏈和輕鏈都有(yǒu)結合反應，即與IgG的Fc的F（ab’）2片段都能(néng)結合；由于IgG、IgM、IgA都有(yǒu)保守的輕鏈結構域，因此Anti-IgG （H+L）與它們都有(yǒu)交叉反應。而Anti-IgG, F（ab’）2 fragment經過了IgG Fc片段的吸附，因此隻與IgG的F（ab’）2片段結合，然而IgG、IgM、IgA都有(yǒu)保守的輕鏈結構域，因此與它們也有(yǒu)交叉反應。