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       狂犬病毒（Rabies Virus，RV）屬于彈狀病毒科(kē)（Rhabdoviridae）狂犬病毒屬（Lyssavirus）。其基因組是長(cháng)約12 kb的單股負鏈RNA，由3′端至5′端依次排列着N、P、M、G和L共5個狂犬病毒的結構基因，分(fēn)别編碼核蛋白、磷蛋白、基質(zhì)蛋白、糖蛋白和轉錄酶大蛋白（如圖1）。
       RV在宿主體(tǐ)内，病毒糖蛋白G介導病毒粒子與細胞表面受體(tǐ)結合，通過内吞作(zuò)用(yòng)進入細胞。随後通過pH介導膜融合，促使RV基因組釋放到細胞質(zhì)中(zhōng)。感染病毒粒子内包裝(zhuāng)的L、N、P共同構成的聚合酶複合物(wù)以基因組負鏈RNA為(wèi)模闆啓動轉錄表達，複制，組裝(zhuāng)，出芽産(chǎn)生子代病毒。（如圖2）
       野生型RV是人畜共患的狂犬病的緻病因子，在神經系統中(zhōng)具(jù)有(yǒu)傳播屬性，對人和動物(wù)均具(jù)有(yǒu)較高緻病性。随着反向遺傳學(xué)手段的成熟，經過改造的RV，可(kě)用(yòng)于神經回路研究。RV感染中(zhōng)樞系統後，主要标記神經元，幾乎不标記膠質(zhì)細胞；被感染的神經元在一定時間内（7-12天）幾乎不發生明顯病變及裂解。目前RV系統可(kě)分(fēn)為(wèi)逆向标記系統和逆向跨單突觸系統。

第一代逆向标記系統（RV-ΔG）

       RV的囊膜糖蛋白（glycoprotein，G）是其逆行跨突觸所必需的蛋白，G蛋白缺失的RV（RV-ΔG）會喪失跨突觸能(néng)力，但其複制及轉錄不受影響（可(kě)持續高豐度表達外源基因），因此，RV-ΔG攜帶報告基因後，可(kě)逆向高亮度标記神經元精(jīng)細形态。

第二代逆向标記系統  [RV-N2c(G)-ΔG]

       CVS-N2c病毒株具(jù)有(yǒu)更低的神經毒性以及更強的跨突觸突觸傳遞能(néng)力，其G蛋白缺失的RV [RV-N2c(G)-ΔG] 能(néng)在更低的滴度達到與第一代RV-ΔG相同甚至更好的逆向标記效果，且神經毒性更低。

逆向跨單突觸系統（RV-EnvA-ΔG）

       利用(yòng)重組的禽類肉瘤病毒（Aviansarcoma-leukosisvirus，ASLV）的外膜蛋白（EnvA）融合蛋白包裝(zhuāng)RV形成的病毒粒子，可(kě)特異性識别EnvA的受體(tǐ)TVA（TVA隻存在于禽類細胞中(zhōng)，在哺乳動物(wù)神經元中(zhōng)無表達）介導病毒特異性地感染細胞。利用(yòng)Cre轉基因鼠結合Cre-LoxP控制表達TVA及G蛋白的AAV輔助病毒，可(kě)實現隻在特定區(qū)域特異類型神經元中(zhōng)表達TVA及G蛋白，從而利用(yòng)RV-EnvA-ΔG實現對特異類型神經元的逆向跨單級突觸标記（如圖3）。在此基礎上，使RV-EnvA-ΔG帶上ChR2及GCaMP等基因，可(kě)實現對特異類型神經元的直接輸出網絡進行功能(néng)操縱及活動監測。

應用(yòng)

1）特定區(qū)域特異類型神經元的全腦單級輸入網絡标記；（見案例展示二）
2）兩個區(qū)域特異類型神經元跨單級輸入網絡标記；（見案例展示一）
3）三級連接網絡的跨單突觸标記。

産(chǎn)品列表

RV-CVS株産(chǎn)品列表：

 

SAD-B19株産(chǎn)品列表：

 

案例展示

實例一：逆向标記海馬錐體(tǐ)神經元中(zhōng)同時作(zuò)用(yòng)于mPFC和ACB中(zhōng)的GABA能(néng)神經元（圖4，PMID: 31285615）

實驗動物(wù)：抑制性神經元(SST, PV, VIP)的Cre小(xiǎo)鼠
使用(yòng)的病毒：RV-EnvA-GFP，AAV-DIO-TVA-hBFP和AAV-DIO-RG
實驗方法和結果：在抑制性神經元(SST, PV, VIP)的Cre小(xiǎo)鼠mPFC腦區(qū)注射RV-EnvA-GFP以及Cre依賴的輔助病毒AAV-DIO-TVA-hBFP和AAV-DIO-RG實現逆向跨單級突觸，同時在ACB腦區(qū)注射從軸突末梢吸收的RV-DG-DsRed，病毒逆向标記海馬體(tǐ)投射到ACB區(qū)的神經元，最終找到海馬體(tǐ)中(zhōng)同時調控mPFC和ACB區(qū)的GABA能(néng)神經元。（如圖4）

實例二VTA多(duō)巴胺能(néng)神經元分(fēn)離的支配NAC和mOT（圖5，PMID: 29251597）

實驗動物(wù)：C57BL/6 mice
使用(yòng)的病毒：RV-DG-DsRed和RV-DG-GFP，滴度10的8次方TU
實驗方法和結果：分(fēn)别注入100 nl RV-DG-DsRed和RV-DG-GFP在NAC和mOT中(zhōng)，1周後灌流取材，可(kě)在VTA追蹤到神經元。