腺相關病毒AAV

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慢病毒載體(tǐ)(lentivirus vector，LV)屬于逆轉錄病毒科(kē)(Retrovidae)，為(wèi) RNA病毒。區(qū)别一般的逆轉錄病毒載體(tǐ)，它對分(fēn)裂細胞和非分(fēn)裂細胞均具(jù)有(yǒu)感染能(néng)力。慢病毒載體(tǐ)的研究發展得很(hěn)快，研究的也非常深入。該載體(tǐ)可(kě)以将外源基因有(yǒu)效地整合到宿主染色體(tǐ)上，從而達到持久性表達。
感染能(néng)力方面可(kě)有(yǒu)效地感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、内皮細胞、幹細胞等多(duō)種類型的細胞，從而達到良好的的基因治療效果，在美國(guó)已經開展了臨床研究，效果非常理(lǐ)想，因此具(jù)有(yǒu)廣闊的應用(yòng)前景。

優勢

慢病毒與其他(tā)病毒工(gōng)具(jù)比較，具(jù)有(yǒu)以下優勢：
1）表達時間長(cháng)：慢病毒通過将外源基因整合到宿主細胞基因組上，可(kě)實現目的基因長(cháng)時間穩定的表達，不随着細胞分(fēn)裂傳代而丢失，是細胞實驗的首選；
2）安(ān)全性高：未發現緻病性，已被用(yòng)于CAR-T 治療作(zuò)用(yòng)于人體(tǐ)；
3）免疫原性低：直接注射活體(tǐ)組織不易造成免疫反應，适用(yòng)于動物(wù)實驗。

可(kě)選擇的病毒載體(tǐ)

詳情見：基因過表達、基因幹擾

應用(yòng)

1）将目的基因 /RNAi 基因轉入難以轉染的細胞，比如神經元細胞、幹細胞或其它原代細胞；
2）将目的基因 /RNAi 基因轉入動物(wù)組織，以期獲得長(cháng)期表達；
3）構建穩定表達目的蛋白 /RNAi 的細胞系，再用(yòng)exvivo的方法導入動物(wù)體(tǐ)内；
4）基因治療；
5）轉基因動物(wù)；
6）基因敲除；
7）藥物(wù)研究：構建表達受體(tǐ)蛋白的細胞系，研究藥物(wù)的作(zuò)用(yòng)；
8）快速建立生産(chǎn)目的蛋白的細胞系，非常有(yǒu)前途的真核細胞表達方法。

案例展示

案例一：慢病毒度感染不同類型的細胞系

圖1. 慢病毒可(kě)以高效的感染各類腫瘤細胞、幹細胞、原代細胞、和不分(fēn)裂的細胞

案例二：LV介導基因沉默體(tǐ)外研究神經元棘突和突觸功能(néng)
神經元細胞感染表達b-Catenin小(xiǎo)發夾RNA (shRNA)的慢病毒，使大部分(fēn)神經元敲除b-Catenin。b-Catenin敲低後，神經元細胞棘突穩定性受到破壞。

圖2. 慢病毒攜帶shRNA介導b-Catenin敲減（Li MY, et al., Neuron, 2017）

案例三：LV介導基因沉默在體(tǐ)研究中(zhōng)間神經元電(diàn)偶聯
将LV-shRNA病毒注射到新(xīn)生P1小(xiǎo)鼠的硬腦膜和皮質(zhì)層P1的間隙（e.f）,P15小(xiǎo)叔中(zhōng)觀察到GFP+主要分(fēn)布在L1，在深層的分(fēn)布較少。

圖3. 誘導型慢病毒shRNA有(yǒu)效介導Connexin36敲減 (Xinghua Yao, et al.,Nat Commun,2017)

案例四：光遺傳學(xué)應用(yòng)
慢病毒可(kě)以攜帶光感基因（ChR2、eNpHR3.0等）感染神經元細胞，實現靶基因的高效表達。

圖4. LV攜帶光敏基因的應用(yòng)(Feng Zhang, Viviana Gradinaru., et al. Nature protocols,2010)

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