5分(fēn)鍾了解\\透射電(diàn)鏡的廣泛應用(yòng)

透射電(diàn)子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,簡稱TEM),可(kě)以看到在光學(xué)顯微鏡下無法看清的小(xiǎo)于0.2um的細微結構，這些結構稱為(wèi)亞顯微結構或超微結構。要想看清這些結構，就必須選擇波長(cháng)更短的光源，以提高顯微鏡的分(fēn)辨率。1932年Ruska發明了以電(diàn)子束為(wèi)光源的透射電(diàn)子顯微鏡，電(diàn)子束的波長(cháng)要比可(kě)見光和紫外光短得多(duō)，并且電(diàn)子束的波長(cháng)與發射電(diàn)子束的電(diàn)壓平方根成反比，也就是說電(diàn)壓越高波長(cháng)越短。目前TEM的分(fēn)辨力可(kě)達0.2nm。

TEM工(gōng)作(zuò)原理(lǐ)：由電(diàn)子槍發射出來的電(diàn)子束，在真空通道中(zhōng)沿着鏡體(tǐ)光軸穿越聚光鏡，通過聚光鏡将之會聚成一束尖細、明亮而又(yòu)均勻的光斑，照射在樣品室内的樣品上；透過樣品後的電(diàn)子束攜帶有(yǒu)樣品内部的結構信息，樣品内緻密處透過的電(diàn)子量少，稀疏處透過的電(diàn)子量多(duō)；經過物(wù)鏡的會聚調焦和初級放大後，電(diàn)子束進入下級的中(zhōng)間透鏡和第1、第2投影鏡進行綜合放大成像，最終被放大了的電(diàn)子影像投射在觀察室内的熒光屏闆上；熒光屏将電(diàn)子影像轉化為(wèi)可(kě)見光影像以供使用(yòng)者觀察。 

圖：暴露于 AgNP 的動物(wù)腦組織的代表性 TEM 顯微照片顯示 RER（箭頭）和擴大的高爾基體(tǐ)複合體(tǐ)（G）的腫脹碎片。

圖：自噬抑制劑對腦組織的亞細胞結構具(jù)有(yǒu)保護作(zuò)用(yòng)。采用(yòng)透射電(diàn)子顯微鏡（TEM）觀察小(xiǎo)鼠腦組織亞細胞結構的病理(lǐ)變化。在 JEV+Rapa 和 JEV 組觀察到腦組織線(xiàn)粒體(tǐ)嚴重損傷，在 JEV+Wort 和 JEV+CQ 組觀察到腦組織線(xiàn)粒體(tǐ)輕微損傷（紅色箭頭，線(xiàn)粒體(tǐ)；比例尺，2 µm）。

圖：附睾 Prm1 缺陷精(jīng)子染色質(zhì)濃縮和 ROS 誘導的 DNA 損傷分(fēn)析。(A) Prm1+/+、Prm1+/- 和 Prm1-/- 附睾精(jīng)子的代表性透射電(diàn)子顯微照片。(B) 來自 Prm1+/+、Prm1+/− 和 Prm1−/− 雄性 (n=3) 的附睾精(jīng)子 DNA 濃縮的定量；對每名(míng)男性 100 個精(jīng)子進行了分(fēn)析。(C) Prm1−/−附睾精(jīng)子的透射電(diàn)子顯微照片。(D) 載有(yǒu)從 Prm1+/-、Prm1-/-、Prm2+/-、Prm2-/- 和通過電(diàn)泳分(fēn)離的 WT 雄性附睾精(jīng)子分(fēn)離的基因組 DNA 的瓊脂糖凝膠。載有(yǒu)梯子 (L) 的其他(tā)車(chē)道已從圖像中(zhōng)剪下。(E) 8-OHdG 陽性精(jīng)子在 Prm1+/+、Prm1+/- 和 Prm1-/- 小(xiǎo)鼠 (n=3) 的附睾頭和尾部組織切片上的百分(fēn)比。(F) 來自 Prm1+/+、Prm1+/- 和 Prm1-/- 雄性的睾丸、附睾頭和附睾尾組織切片中(zhōng)針對 8-OHdG 的代表性 IF 染色。

圖：巨噬細胞耗竭可(kě)改善糖尿病小(xiǎo)鼠的腎髒損傷并減少 M1 巨噬細胞浸潤。(A) 小(xiǎo)鼠腎組織的組織病理(lǐ)學(xué)染色和透射電(diàn)子顯微鏡 (TEM)。蘇木(mù)精(jīng)-伊紅（HE）染色（放大倍數：200×）；高碘酸席夫（PAS）染色（放大倍數：400×）；馬松三色（Masson）染色（放大倍數：200×）；過碘酸-甲胺銀（PASM）染色（放大倍數：400×）；透射電(diàn)子顯微鏡圖像（放大倍數：4000×）。（B）小(xiǎo)鼠腎髒的F4/80免疫組化染色。原始放大倍數：200×.(C)CD68/iNOS 小(xiǎo)鼠腎組織共免疫熒光染色。

圖：二甲雙胍保護股動脈超微結構免受繼發于糖尿病的改變。實驗結束時、第 12 周對照組未治療組（A、B）、糖尿病說明了組 (T2DM) (C,D) 和治療組 (Met + T2DM) (E,F)。請注意，（A、E）中(zhōng)的箭頭指向質(zhì)膜，（B）中(zhōng)的箭頭指向被破壞的質(zhì)膜。(A,E) 中(zhōng)的箭頭指向完整的内膜表面，(C) 中(zhōng)的箭頭指向受損的内膜表面。而 (B,F) 中(zhōng)的箭頭指向完整的質(zhì)膜，而 (D) 中(zhōng)的箭頭指向不規則形狀的質(zhì)膜。(D,F) 中(zhōng)的星号分(fēn)别指向受損和完整的肌動蛋白和肌球蛋白絲狀網絡。N：細胞核；Lu：血管腔；En：内皮細胞；米：線(xiàn)粒體(tǐ)；RER：粗面内質(zhì)網；e：外彈力層；V：液泡；SMC：平滑肌細胞。(G) 中(zhōng)的直方圖表示對上述組的内膜損傷百分(fēn)比的定量分(fēn)析。

骨組織取材：骨組織分(fēn)布廣，有(yǒu)的較硬，有(yǒu)的較軟，骨組織因為(wèi)無機物(wù)沉積較多(duō)（主要為(wèi)鈣鹽的沉積）而較硬，必須經過脫鈣處理(lǐ)（軟骨組織可(kě)以不用(yòng)脫鈣）。首先将骨組織切取一小(xiǎo)片，大概1-2毫米大小(xiǎo)，經過4%戊二醛固定2小(xiǎo)時以上，再經生理(lǐ)鹽水漂洗後放入脫鈣液内進行脫鈣，一般選擇溫和的EDTA脫鈣液脫鈣，也可(kě)利用(yòng)酸類進行脫鈣，至于判斷脫鈣程度如何，可(kě)以使用(yòng)鑷子夾住骨片，輕輕将兩端向中(zhōng)心壓攏，感覺其彈性強度進而判斷脫鈣程度。脫鈣完成後先經生理(lǐ)鹽水漂洗後再用(yòng)4%戊二醛固定2小(xiǎo)時，然後按常規方法進行處理(lǐ)。