腺病毒ADV

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腺病毒（Adenovirus, ADV）是一種無包膜的線(xiàn)性雙鏈DNA病毒，具(jù)有(yǒu)廣泛的細胞和組織感染能(néng)力。感染過程劇烈，适于短時間内進行基因高表達的實驗，與其它病毒相比，腺病毒優勢在于插入片段較長(cháng)，表達活性強。

　　體(tǐ)外應用(yòng)時，腺病毒載體(tǐ)轉基因效率高（接近100%的轉導效率），且可(kě)轉導不同類型的細胞，對于大量難轉染細胞的基因遞送是一個很(hěn)好的工(gōng)具(jù)。但是，在體(tǐ)内應用(yòng)時，由于腺病毒免疫原性強，感染劇烈，故常會引起動物(wù)局部組織炎症反應和機體(tǐ)免疫反應，對動物(wù)體(tǐ)征和實驗結果的客觀性造成影響。

ADV包裝(zhuāng)和侵染過程

腺病毒包裝(zhuāng)與純化

腺病毒包裝(zhuāng)骨架達質(zhì)粒與穿梭質(zhì)粒共轉染HEK-293細胞，待細胞出現CPE狀态後通過收集細胞上清和細胞裂解物(wù)，通過濃縮或氯化铯密度梯度離心純化病毒。

　　CPE（Cytopathic Effect）：病毒對組織培養細胞侵染後産(chǎn)生的細胞變性，利用(yòng)此種病變效應可(kě)進行病毒定量。

腺病毒滴度檢測

　檢測方法：酶聯免疫法腺病毒滴度測定，根據計算感染後染成褐色的陽性細胞數，來計算病毒滴度。
實驗原理(lǐ)：腺病毒感染的陽性細胞表達的衣殼蛋白被染成褐色。
檢測方法：免疫顯色方法
實驗原理(lǐ)：通過抗5型腺病毒外殼蛋白的單抗與待感染腺病毒樣品的細胞結合，再用(yòng)HRP标記的二抗與一抗結合，經顯色液顯色，被感染的細胞變成褐色，根據陽性細胞數，來計算病毒滴度。

腺病毒載體(tǐ)優勢

① 表達快，腺病毒感染細胞後，1-2天即可(kě)表達
② 載體(tǐ)容量大，感染效率高，常用(yòng)于感染難感染的細胞
③ 不整合到染色體(tǐ)中(zhōng)，無插入緻突變性
④ 具(jù)有(yǒu)嗜肝性，易于感染肝細胞，腺病毒的體(tǐ)内應用(yòng)是用(yòng)于感染肝髒

　不過由于腺病毒免疫原性高，對某些對外源刺激敏感的動物(wù)模型和組織中(zhōng)易造成炎症，體(tǐ)内應用(yòng)需謹慎。

不同病毒的生物(wù)學(xué)特性比較

載體(tǐ)選擇

　　和元生物(wù)擁有(yǒu)豐富的腺病毒産(chǎn)品，用(yòng)于操作(zuò)編碼基因和非編碼基因，如lncRNA、microRNA、circRNA。
以下腺病毒載體(tǐ)可(kě)供您選擇：

調控方式	載體(tǐ)編号	載體(tǐ)名(míng)稱（載體(tǐ)元件順序）	真核抗性	熒光	啓動子	默認标簽	載體(tǐ)容量
過表達	H225	pADV-mCMV-MCS-3xFLAG	N/A	N/A	mCMV	3FLAG	>6kb
	H201	pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG	N/A	EGFP	mCMV	3FLAG	>5kb
	H213	pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP	N/A	EGFP	mCMV	3FLAG	>5kb
	H221	pADV-mCMV-3xFLAG-P2A-EGFP	N/A	EGFP	mCMV	3FLAG	>5kb
	H204	pADV-mCMV-mCherry-HA	N/A	mCherry	mCMV	HA	>5kb
	H222	pADV-mCMV-3xFLAG-T2A-mCherry	N/A	mCherry	mCMV	3FLAG	>5kb
	H12588	pADV-EF1-mNeonGreen-CMV-MCS-3xFLAG	N/A	mNeonGreen	CMV	3FLAG	>4kb
	H12589	pADV-EF1-mScarlet-CMV-MCS-3xFLAG	N/A	mScarlet	CMV	3FLAG	>4kb
circRNA過表達	H6946	pADV-CMV-S-circRNA	N/A	N/A	CMV	N/A	>5kb
miRNA過表達	H216	pADV-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFP	N/A	EGFP	U6	N/A	N/A
表達cre	K0024	pADV-CMV-Cre	N/A	N/A	CMV	N/A	N/A
幹擾	DKD001	pADV-U6-shRNA-CMV-EGFP	N/A	EGFP	U6	N/A	N/A
幹擾	DKD004	pADV-U6-shRNA-CMV-mCherry	N/A	mCherry	U6	N/A	N/A
CRISPR敲除	H5064	pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-3xFLAG-spCas9	N/A	N/A	U6	3FLAG	N/A
	H9350	pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9	N/A	sfGFP	U6	3FLAG	N/A
	H5066	pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP	N/A	EGFP	U6	N/A	N/A
	H218	pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-spCas9	N/A	mCherry	CMV	3FLAG	N/A
	H5449	pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-eSpCas9_1.1	N/A	mCherry	CMV	3FLAG	N/A

應用(yòng)實例

　　1.Hepatology. (IF=14.079). Zhou YF,et.al. (2018). Cystathionine β-synthase is required for body iron homeostasis. [腺病毒, 肝髒]

　　感染部位：肝髒

　　載體(tǐ)名(míng)稱：Ad-CBS

　　注射方式：尾靜脈

　　注射量：1 x10¹¹PFU/mL，10ul

　　檢測時間：7天

　　2. Diabetes. (IF=8.095). Xiao Y Z,et.al. (2015). Activation of ERK1/2 ameliorates liver steatosis in leptin receptor deficient (db/db)mice via stimulating ATG7-dependent autophagy. [腺病毒, 肝髒]

　　感染部位：肝髒

　　載體(tǐ)名(míng)稱：Ad-ATG7

　　注射方式：尾靜脈

　　注射量：1 x10⁹PFU /隻

　　檢測時間：10天

　　3. Molecular Neurobiology. (IF=5.397). Guo J,et.al. (2015). Overexpression of Fibulin-5 Attenuates Ischemia/Reperfusion Injury After Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats. [腺病毒, 大鼠]

　　注射部位：大鼠大腦皮層

　　載體(tǐ)名(míng)稱：Ad-FBLN

　　注射方式：腦立體(tǐ)定位注射

　　注射量：三種不同劑量

　　檢測時間：7天

　　和元生物(wù)腺病毒的生産(chǎn)和質(zhì)控采取了國(guó)際學(xué)術界公(gōng)認的标準流程，采用(yòng)AdEasy及Admax腺病毒包裝(zhuāng)系統在HEK-293細胞中(zhōng)進行包裝(zhuāng)。所獲得的病毒顆粒經過超速密度梯度離心和過濾，并通過殼蛋白免疫法進行滴度測定。一般情況下腺病毒的滴度在10¹⁰~10¹¹pfu/ml，完全可(kě)以滿足各類實驗的使用(yòng)要求。

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