慢病毒

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簡介

慢病毒載體(tǐ)(lentivirus vector，LV)屬于逆轉錄病毒科(kē)(Retrovidae)，為(wèi) RNA病毒。區(qū)别一般的逆轉錄病毒載體(tǐ)，它對分(fēn)裂細胞和非分(fēn)裂細胞均具(jù)有(yǒu)感染能(néng)力。慢病毒載體(tǐ)的研究發展得很(hěn)快，研究的也非常深入。該載體(tǐ)可(kě)以将外源基因有(yǒu)效地整合到宿主染色體(tǐ)上，從而達到持久性表達。
感染能(néng)力方面可(kě)有(yǒu)效地感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、内皮細胞、幹細胞等多(duō)種類型的細胞，從而達到良好的的基因治療效果，在美國(guó)已經開展了臨床研究，效果非常理(lǐ)想，因此具(jù)有(yǒu)廣闊的應用(yòng)前景。

優勢

慢病毒與其他(tā)病毒工(gōng)具(jù)比較，具(jù)有(yǒu)以下優勢：
1）表達時間長(cháng)：慢病毒通過将外源基因整合到宿主細胞基因組上，可(kě)實現目的基因長(cháng)時間穩定的表達，不随着細胞分(fēn)裂傳代而丢失，是細胞實驗的首選；
2）安(ān)全性高：未發現緻病性，已被用(yòng)于CAR-T 治療作(zuò)用(yòng)于人體(tǐ)；
3）免疫原性低：直接注射活體(tǐ)組織不易造成免疫反應，适用(yòng)于動物(wù)實驗。

不同病毒的生物(wù)學(xué)特性比較

載體(tǐ)選擇
　　宣尊生物(wù)擁有(yǒu)豐富的慢病毒産(chǎn)品，用(yòng)于操作(zuò)編碼基因和非編碼基因，如lncRNA、microRNA、circRNA，如下慢病毒載體(tǐ)可(kě)供您選擇（不限于此列表）：

調控方式	載體(tǐ)編号	載體(tǐ)名(míng)稱（載體(tǐ)元件順序）	真核抗性	熒光	啓動子	默認标簽	載體(tǐ)容量
過表達	GL127	pSLenti-CMV-EGFP-3xFLAG-WPRE	N/A	EGFP	CMV	3FLAG	4.8kb
	GL121	pSLenti-EF1-EGFP-CMV-MCS-WPRE	N/A	EGFP	CMV	N/A	4.4kb
	GL129	pSLenti-CMV-mCherry-3xFLAG-WPRE	N/A	mCherry	CMV	3FLAG	4.8kb
	GL119	pSLenti-CMV-MCS-3xFLAG-PGK-Puro-WPRE	Puro	N/A	CMV	3FLAG	4.4kb
	GL120	pSLenti-SFH-EGFP-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPRE	Puro	EGFP	CMV	3FLAG	3.5kb
	GL107	pSLenti-EF1-EGFP-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPRE	Puro	EGFP	CMV	3FLAG	3.7kb
	GL109	pSLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-CMV-MCS-WPRE	Puro	EGFP	CMV	N/A	3.8kb
	GL122	pSLenti-EF1-EGFP-F2A-BSR-CMV-MCS-WPRE	blasticidin	EGFP	CMV	N/A	3.9kb
	GL130	pSLenti-CMV-EGFP-3xFLAG-PGK-Puro-WPRE	Puro	EGFP	CMV	3FLAG	3.7kb
	GL132	pSLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-WPRE2-CMV-MCS	Puro	EGFP	CMV	N/A	3.7kb
	GL123	pSLenti-EF1-mCherry-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPRE	Puro	mCherry	CMV	3FLAG	3.7kb
	GL125	pSLenti-CMV-mCherry-3xFLAG-PGK-Puro-WPRE	Puro	mCherry	CMV	3FLAG	3.7kb
	GL133	pSLenti-EF1-mCherry-F2A-Puro-WPRE2-CMV-MCS	Puro	mCherry	CMV	N/A	3.7kb
	H114	pLenti-CMV-Luc2-IRES-Puro-WPRE	Puro	N/A	CMV	N/A	2.2kb
	GL124	pSLenti-EF1-Luc2-F2A-Puro-CMV-MCS-WPRE	Puro	N/A	CMV	N/A	2.8kb
表達cre	H126	pLenti-CMV-NLS-Cre-3xFLAG-WPRE	N/A	N/A	CMV	3FLAG	3.9kb
表達cre	H15108	pLenti-CMV-DIO-MCS-WPRE	N/A	N/A	CMV	3FLAG	5.3kb
三标	H7656	pLenti-CBh-3xFLAG-Luc2-tCMV-mNeonGreen-F2A-Puro-WPRE	Puro	mNeonGreen	CBh	3FLAG	1.3kb
	H7657	pLenti-CBh-3xFLAG-Luc2-tCMV-tdTomato-F2A-Puro-WPRE	Puro	tdTomato	CBh	3FLAG	0.6kb
	H9911	pLenti-CBh-3xFLAG-Luc2-tCMV-mNeonGreen-F2A-BSR-WPRE	blasticidin	mNeonGreen	CBh	3FLAG	1.5kb
	H9912	pLenti-CBh-3xFLAG-Luc2-tCMV-tdTomato-F2A-BSR-WPRE	blasticidin	tdTomato	CBh	3FLAG	0.8kb
circRNA過表達	H8384	pLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-CMV-S-circRNA-WPRE	N/A	EGFP	CMV	N/A	3.0kb
	H8807	pLenti-CMV-S-circRNA-WPRE	N/A	N/A	CMV	N/A	4.8kb
	H8399	pLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-CMV-L-circRNA-WPRE	Puro	EGFP	CMV	N/A	1.0kb
	H8810	pLenti-CMV-L-circRNA-WPRE	N/A	N/A	CMV	N/A	2.8kb
miRNA過表達	GL109	pSLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-CMV-MCS-WPRE	Puro	EGFP	CMV	N/A	N/A
	H3919	pCLenti-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE	Puro	EGFP	U6	N/A	N/A
	H119	pLenti-CMV-TurboGFP-IRES-Puro-miR30(miRNA)-WPRE	Puro	TurboGFP	CMV	N/A	N/A
	H3928	pCLenti-U6-miR30(miRNA)-CMV-mCherry-F2A-Puro-WPRE	Puro	mCherry	U6	N/A	N/A
	H146	pCLenti-EF1-Puro-CMV-EGFP-3xFLAG-Sponge(miRNA)-WPRE	Puro	EGFP	CMV	3FLAG	N/A
	H7505	pCLenti-U6-TuD(miRNA)-CMV-EGFP-F2A-BSR-WPRE	blasticidin	EGFP	CMV	N/A	N/A
	H7506	pCLenti-U6-TuD(miRNA)-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE	Puro	EGFP	CMV	N/A	N/A
過表達（Tet-on）	H125	pLenti-TRE-EGFP-EF1-rtTA3-IRES-Puro-WPRE	Puro	EGFP	TRE	N/A	2.0kb
	H121	pLenti-TRE-EGFP-3xFLAG-PGK-Puro-WPRE	Puro	EGFP	TRE	3FLAG	3.3kb
	H2057	pLenti-EF1-rtTA3-IRES-Puro-WPRE	Puro	N/A	EF1	N/A	N/A
shRNA幹擾	GL401	pCLenti-U6-shRNA-CMV-Puro-WPRE	Puro	N/A	U6	N/A	N/A
	GL404	pCLenti-U6-shRNA-CMV-EGFP-WPRE	N/A	EGFP	U6	N/A	N/A
	GL427	pSLenti-U6-shRNA-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE	Puro	EGFP	U6	N/A	N/A
	GL428	pSLenti-U6-shRNA-CMV-mCherry-F2A-Puro-WPRE	Puro	mCherry	U6	N/A	N/A
	H7615	pCLenti-U6-shRNA-CMV-mCherry-F2A-BSR-WPRE	blasticidin	mCherry	U7	N/A	N/A
CRISPR敲除	H5070	pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE	Puro	N/A	U6	N/A	N/A
	H7072	pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-BSR-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE	blasticidin	N/A	U6	N/A	N/A
	H6825	pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE	N/A	sfGFP	U6	N/A	N/A
	H5068	pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP-WPRE	N/A	EGFP	U7	N/A	N/A
	H5450	pLenti-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-espCas9_1.1-WPRE	Puro	N/A	CMV	3FLAG	N/A
CRISPRa轉錄激活	H9517	pCLenti-U6-gRNA-MS2-EFS-dCas9-VP64-T2A-BSD-WPRE	blasticidin	N/A	U6	N/A	N/A
	E2577	pCLenti-EF1a-MCP-P65-HSF1-T2A-Hygro-WPRE	hygromycin	N/A	EF1a	N/A	N/A
	H7284	pCLenti-U6-gRNA-2x(wt+f6)MS2-CMV-MCP-P65-HSF1-IRES-BSR-WPRE	blasticidin	N/A	U6/CMV	N/A	N/A
	H7281	pLenti-CMV-dCas9-VP64-T2A-Puro-WPRE	Puro	N/A	CMV	N/A	N/A

應用(yòng)

1）将目的基因 /RNAi 基因轉入難以轉染的細胞，比如神經元細胞、幹細胞或其它原代細胞；
2）将目的基因 /RNAi 基因轉入動物(wù)組織，以期獲得長(cháng)期表達；
3）構建穩定表達目的蛋白 /RNAi 的細胞系，再用(yòng)exvivo的方法導入動物(wù)體(tǐ)内；
4）基因治療；
5）轉基因動物(wù)；
6）基因敲除；
7）藥物(wù)研究：構建表達受體(tǐ)蛋白的細胞系，研究藥物(wù)的作(zuò)用(yòng)；
8）快速建立生産(chǎn)目的蛋白的細胞系，非常有(yǒu)前途的真核細胞表達方法。

　　常見MOI列表

細胞名(míng)	中(zhōng)文(wén)名(míng)稱	慢病毒感染MOI （參考值）
MGC80-3	人胃癌細胞	10
HT-29	人結腸癌細胞	20
RKO	人結腸腺癌細胞	10
Caki-1	人腎透明細胞癌皮膚轉移細胞	10
5637	人膀胱癌細胞	10
U-118 MG	人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤	10
RWPE-1	人正常前列腺上皮細胞	20
HeLa	人宮頸癌細胞	10~20
Ca Ski	人宮頸癌腸轉移細胞	10
MCF7 [MCF-7]	人乳腺癌細胞	10
A549	人非小(xiǎo)細胞肺癌細胞	10
NCI-H1299	人非小(xiǎo)細胞肺癌細胞	20
U-87 MG	人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤	10
U251	人膠質(zhì)瘤細胞	10
A172	人膠質(zhì)母細胞瘤細胞	10
K-562	人慢性髓原白血病細胞	10
HL-60	人原髓細胞白血病細胞	10
GES-1	人胃上皮細胞	20
U266	人骨髓瘤細胞	20
CAL 27	人舌鱗癌細胞	20
PC9	人肺癌細胞	5
PC14	人肺癌細胞	10
MADB-106	大鼠乳腺癌細胞	20
F98	大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞	20
MHCC-97H	人肝癌細胞（高轉移）	10~20

　
　　MOI 是multiplicity of infection 的縮寫，即感染複數，其含義是感染時病毒與細胞的數量比值，一般以實驗中(zhōng)某個細胞，感染達到80%，定義為(wèi)這個細胞的MOI值，即病毒量與細胞數的比值；加的病毒量(μl)=細胞數×MOI/滴度(…/ml) ×1000

慢病毒在腫瘤研究中(zhōng)的應用(yòng)案例

1.Nature Communications. (IF=12.353). Shi Y,et.al. (2017). Tumour-associated macrophages secrete pleiotrophin to promote PTPRZ1 signalling in glioblastoma stem cells for tumour growth.[慢病毒, 膠質(zhì)細胞瘤]
慢病毒幹擾： Lenti-shNT/shPTN/shPTPRZ1

2. Hepatology. (IF=14.079). Ma JZ,et.al. (2016). METTL14 suppresses the metastatic potential of HCC by modulating m6 A-dependent primary miRNA processing. [慢病毒, 肝癌]
慢病毒過表達/幹擾：pLV-CMV-PGK-EGFP-T2A-puro/ pLV-U6-shRNA-CMV-EGFP-T2A-puro

慢病毒在神經系統的應用(yòng)（在體(tǐ)注射）
1．Nature Neuroscience. (IF=19.912). Ding XL,et.al. (2017). Activity-induced histone modifications govern Neurexin-1 mRNA splicing and memory preservation. [慢病毒, 學(xué)習與記憶]

病毒類型：慢病毒
載體(tǐ)名(míng)稱：LV-Suv39h1-RNAi（不确定詳細的）
注射部位：海馬DG區(qū)
病毒注射量：2 μL，9.98 × 10⁸ TU/mL
檢測時間：2周

2．Nature Communications. (IF=12.353). Yao XH,et.al. (2016). Electrical coupling regulates layer 1 interneuron microcircuit formation in the neocortex. [慢病毒, 神經環路]

病毒類型：慢病毒
載體(tǐ)名(míng)稱：LV- CX36-shRNA-EGFP（不确定詳細的）
注射部位：P1小(xiǎo)鼠新(xīn)皮層L1
病毒注射量：1μL
檢測時間：2周
3．Molecular Psychiatry. (IF=11.64). Guo DJ,et.al. (2019). Autism-like social deficit generated by Dock4 deficiency is rescued by restoration of Rac1 activity and NMDA receptor function. [慢病毒, 自閉症]

病毒類型：慢病毒
載體(tǐ)名(míng)稱：Lenti-CMV-EGFP-P2A-3FLAG-Rac1
注射部位：小(xiǎo)鼠海馬CA1區(qū)
病毒注射量：1μL
檢測時間：4周

慢病毒延伸服務(wù)

宣尊生物(wù)慢病毒的生産(chǎn)和質(zhì)控采取了國(guó)際學(xué)術界公(gōng)認的标準流程，采用(yòng)三質(zhì)粒或四質(zhì)粒系統在293T細胞中(zhōng)進行包裝(zhuāng)。所獲得的病毒顆粒經過超速離心純化，并通過qPCR對病毒基因拷貝進行滴定。一般情況下我們的慢病毒的滴度在10⁸~10⁹TU/ml，完全可(kě)以滿足各類實驗的使用(yòng)要求。

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