眼科(kē)測試服務(wù)
以下是我司提供測試服務(wù)的設備以及一些已成功構建的測試模型的簡要介紹。
一、長(cháng)期微重力暴露所緻眼損傷疾病動物(wù)模型
探索構建長(cháng)期微重力暴露所緻眼部損傷疾病動物(wù)模型的方法。
将 24 隻 SD 大鼠随機分(fēn)為(wèi)實驗組和對照組。模型組采用(yòng) 30°尾部懸吊後肢去負荷的方法進行長(cháng)期微重力效應的模拟，分(fēn)别在造模4周和8周後，對相應實驗組和對照組大鼠視網膜情況進行檢查。采用(yòng)視網膜電(diàn)圖(ERG)和視覺誘發電(diàn)位( VEP)檢測視網膜功能(néng)，采用(yòng) OCT和視網膜石蠟切片觀察視網膜形态，同時通過視網膜成像系統進行眼底血管觀察。
大鼠尾部懸吊處理(lǐ) 4周後，其視網膜功能(néng)和結構并沒有(yǒu)發生明顯變化；而尾部懸吊處理(lǐ) 8周後，大鼠視網膜功能(néng)及形态發生明顯改變，具(jù)體(tǐ)表現為(wèi)ERG暗适應3.0反應振幅明顯下降[(686.60±86.20)vs.(158.80±23.69)μV,P<0.05],VEP的P1波峰時值延長(cháng)[(89.83±4.98)vs.(96.67±4.41)ms,P<0.05]，OCT觀察眼底可(kě)見其外核層變薄[(35.13±1.02)vs.(20.32 ±1.92)μm，P<0.05]，眼底可(kě)見脈絡膜血管血流增多(duō)。
SD 大鼠尾部懸吊8周可(kě)以很(hěn)好地模拟長(cháng)期微重力環境暴露所緻眼部損傷，可(kě)作(zuò)為(wèi)該現象發病機制研究較好的疾病動物(wù)模型。
OCT視網膜斷層結果顯示模型組視網膜外核層變薄、缺失，RPE層界面模糊，正常組視網膜結構清晰，分(fēn)界明顯，無明顯差異。
眼底照相未見明顯視乳頭水腫及棉絮斑等，但可(kě)見脈絡膜血流增多(duō)，FFA造影未見明顯性差異。
ERG波形顯示正常組五項檢測指标波形标準完整，具(jù)有(yǒu)典型的波形，顯示視網膜功能(néng)完整，模型組五項檢測指标波形趨近于直線(xiàn)，顯示視網膜功能(néng)不完整。
二、光化學(xué)法建立視網膜分(fēn)支靜脈阻塞大鼠模型
觀察光化學(xué)法構建視網膜分(fēn)支靜脈阻塞(branch retinalvein occlusion,BRVO)大鼠模型的自然病程和不良事件。
選取 30 隻 SD(Sprague Dawley)大鼠尾靜脈注射孟加拉紅1min 後,532nm 激光(80mW,100um,100ms)于視盤颞側視網膜靜脈二級分(fēn)叉處進行單光點光凝 50點建立 BRVO 模型。分(fēn)别于1、3、7、14、21和28d檢測全視野視網膜電(diàn)圖(electroretinogram,ERG)、熒光素眼底血管造影(fundus fluorescein angiography,FFA)和相幹光斷層掃(optical coherence tomography, OCT)。
光凝後,3 隻大鼠死亡,3 隻嚴重出血導緻視網膜大部分(fēn)脫離,1隻出現視網膜凹陷,1隻白内障。FFA 和眼底(熒光)彩照發現 BRVO 大鼠模型造模成功率為(wèi)73%(22/30),1d 時近端變粗,遠(yuǎn)端變細,3-7d 光凝血管完全再通。ERG 示光凝1d 後暗适應 3.0 反應b波降低至正常眼的 0.694±0.042 倍,5-7d 下降至最低點約為(wèi)正常眼 0.487±0.064倍,之後開始上升,21d 上升至初始值0.708±0.0465 倍OCT在體(tǐ)水平發現第 1d視網膜節細胞層和外核層水腫,3-5d水腫消失且激光光凝點視網膜附近 250um 外核層開始凋亡變薄,到 21d 外核層變薄隻剩 3-4 層細胞。
激光光凝制作(zuò) BRVO 模型是一種切實可(kě)行的方法,其疾病的演變和發展可(kě)以部分(fēn)模拟人體(tǐ) BRVO 的進程。同時由于造模成功率較低以及激光光凝相關并發症較多(duō),在實際使用(yòng)中(zhōng)有(yǒu)待進一步改進方法。
OCT檢查定量分(fēn)析顯示損傷部位視網膜厚度随着時間變化呈先腫脹在變薄最後厚度在有(yǒu)所恢複。
眼底彩照及FFA造影結果可(kě)見1d時靜脈血管還處于阻塞狀态血管變細，出現血液斷流現象，3d後血管再通但是血管還處于很(hěn)細狀态随着時間變化血管逐漸呈變粗趨勢。
最大混合反應ERGb波(d3.0)，在3d是幅值處于較低水平顯示出靜脈阻塞導緻視網膜整體(tǐ)功能(néng)不好，但是時間的延長(cháng)，靜脈阻塞處自通，視網膜回複正常功能(néng)，視電(diàn)幅值、峰時也處于較正常水平。
三、藥物(wù)誘導視網膜色素變性模型
觀察藥物(wù)誘導鼠視網膜變性模型的眼底形态學(xué)變化特點，着重關注色素上皮層變化情況。
腹腔注射mnu為(wèi)例
27隻C57小(xiǎo)鼠随機分(fēn)成3組，即正常組、MNU低劑量組、MNU高劑量組，每組9隻。MNU低劑量組、高劑量組給予MNU40mg/kg,60mg/kg腹腔注射，正常組不做任何處理(lǐ)。分(fēn)别于實驗後第1天，3天，7天應用(yòng)眼科(kē)超顯微成像系統+視網膜成像系統進行眼底彩照、熒光素鈉血管造影(FFA)、OCT檢測。
MNU低劑量組、高劑量組FFA檢測在實驗後7天内未發現明顯改變，未出現眼底血管滲漏影(附圖1)。OCT檢測結果顯示，造模後1天MNU低劑量組、高劑量組均出現外核層(ONL)呈高高影，與正常組ONL的低密度黑影呈明顯對比，但厚度未出現明顯改變(正常組、MNU低劑量組、高劑量組分(fēn)别為(wèi)81.40±0.29μm,80.73±0.90μm,80.40±2.62μm,F=0.771,兩兩間P>0.05)造模後3天ONL開始出現變薄，MNU低劑量組ONL厚度較高劑量組的厚(正常組、MNU低劑量組、高劑量組分(fēn)别為(wèi)82.47±0.85μm,52.27±0.39μm,42.03±0.99 μm,F<0.000,兩兩間P<0.01),直到7天時ONL幾乎消失;(82.77±0.52μm,17.367±0.44μm,12.87±0.77μm)(附圖2)。眼底彩照結果可(kě)見MNU低劑量組、高劑量組眼底色素上皮層從實驗3天後開始出現紊亂、缺失，視網膜血管變細變白、硬化，甚至閉鎖萎縮，視盤變凸反光增強，呈劑量效應7天時兩組間眼底改變程度相似(附圖3)。
MNU誘導小(xiǎo)鼠視網膜變性模型除了視網膜外核層凋亡外，色素上皮層也有(yǒu)明顯病變，7可(kě)作(zuò)為(wèi)視網膜色素變性中(zhōng)色素上皮素層損傷模型。
OCT檢測結果顯示，造模後1天MNU低劑量組、高劑量組均出現外核層（ONL）呈高亮影，與正常組ONL的低密度黑影呈明顯對比，但厚度未出現明顯改變；造模後3天ONL開始出現變薄，MNU低劑量組ONL厚度較高劑量組的厚。
注：色素變化
眼底彩照結果可(kě)見從實驗1到3天後開始出現紊亂、缺失，眼底血管變細變白，視盤變凸反光增強，呈劑量效應；7天時色素呈花(huā)斑狀，正常組眼底色素、血管未見明顯變化。
注：FFA變化
MNU低劑量組、高劑量組FFA檢測在實驗後7天内未發現明顯改變，未出現眼底血管滲漏影。
四、視網膜光損傷模型
建立和研究視網膜光損傷動物(wù)模型,觀察較強可(kě)見光對大鼠視網膜光損傷的病理(lǐ)變化。
公(gōng)司提供的光損傷設備,取健康成年SD大鼠35隻,随機分(fēn)成正常對照組(CON).光損傷後1 d(D1)、3 d(D3)、5 d(D5)、7 d(D7)組,每組7隻,各組大鼠在12 h明12h暗環境中(zhōng)飼養7 d,然後暗适應36 h。D1、D3、D5、D7組大鼠采用(yòng)4178 Lux照度的可(kě)見光進行12 h間歇光照射,連續3 d,總計36 h,然後在正常環境中(zhōng)分(fēn)别飼養1 d、3d、5 d和7 d。大鼠麻醉進行活體(tǐ)觀察視覺電(diàn)生理(lǐ)、眼彩照及FFA熒光造影、OCT斷層檢查。
正常大鼠視網膜OCT結構層次清楚,内、外節視杆排列整齊、規則。眼底照相未見明顯視乳頭水腫及棉絮斑等，但可(kě)見脈絡膜血流增多(duō)，FFA造影未見明顯性差異，視覺電(diàn)生理(lǐ)各項指标幅值均降低，OPS出現少波現象。
采用(yòng)4178 Lux照度的可(kě)見光較長(cháng)時間(36 h)間歇照射可(kě)誘導大鼠視網膜光損傷，成功地模拟了大鼠視網膜光損傷模型。在光損傷的早期,即出現形态的變化,并随着時間的延長(cháng)損傷逐漸加重。
正常組大鼠視網膜OCT 成像各層結構未見明顯異常，外、内核層結構清晰均成低密度影；模型組大鼠視網膜OCT檢測發現大鼠出現外核層（ONL）呈較高亮影，與正常組ONL的低密度黑影呈明顯對比，但厚度未出現明顯改變。
注：眼底彩照及FFA變化
眼底彩照及FFA未見明顯變化
正常組與模型組比較，模型組五項檢測指标都有(yǒu)較大程度幅值降低清理(lǐ)OPs波出現少波和幅值降低情況顯示出光損傷導緻視網膜整體(tǐ)功能(néng)不好。
五、脈絡膜新(xīn)生血管模型
探索構建動物(wù)眼底脈絡膜新(xīn)生血管模型的方法。
使用(yòng) 532nm波長(cháng)的激光，在遠(yuǎn)離視神經(100um,125mv 0.1s)的眼底 1.5-2.0視盤直徑上進行激光光凝。有(yǒu)氣泡産(chǎn)生(證明擊破Bruch膜)，且無出血的激光斑作(zuò)為(wèi)有(yǒu)效光斑。分(fēn)别于實驗後第1d應用(yòng)眼科(kē)超顯微成像系統和視網膜成像系統、視覺電(diàn)生理(lǐ)儀進行眼底彩照、熒光素鈉血管造影(FFA)、OCT檢測、ERG檢查。
OCT結果顯示損傷點脈絡膜向内層隆起或向下損傷，并且脈絡膜層分(fēn)離形成空隙或完全損壞。眼底彩照結果可(kě)見眼底有(yǒu)五處脈絡膜損傷點，損傷點外圍邊緣呈白色。FFA造影顯示損傷點随着熒光充盈呈現出高亮、團狀的形狀。
C57鼠可(kě)以很(hěn)好地模拟脈絡膜新(xīn)生血管眼部損傷，可(kě)作(zuò)為(wèi)該現象發病藥理(lǐ)研究較好的疾病動物(wù)模型。
OCT結果顯示損傷點脈絡膜向内層隆起或向下損傷，并且脈絡膜層分(fēn)離形成空隙或完全損壞。
眼底彩照結果可(kě)見眼底有(yǒu)五處脈絡膜損傷點，損傷點外圍邊緣呈白色。FFA造影顯示損傷點随着熒光充盈呈現出高亮、團狀的形狀。
六、維持生理(lǐ)鹽水造成前房高眼壓緻青光眼的模型
觀測通過生理(lǐ)鹽水維持前房高眼壓緻青光眼的模型眼底的變化。
将 24 隻 SD 大鼠随機分(fēn)為(wèi)實驗組和對照組。模型組采用(yòng)生理(lǐ)鹽水維持前房高眼壓緻青光眼操作(zuò)，正常組不做任何處理(lǐ)，分(fēn)别在造模7d/14d/21d/28d後，對相應實驗組和對照組大鼠視網膜情況進行檢查。應用(yòng)眼科(kē)超顯微成像系統和視網膜成像系統、視覺電(diàn)生理(lǐ)儀進行眼底彩照、熒光素鈉血管造影(FFA)OCT檢測、ERG檢查
OCT7d時視網膜外核層小(xiǎo)時變薄，各層界限模糊14d-28d外核層随時間變化變薄的同事内界膜到内核層也逐漸變薄，斷層清晰度也逐漸降低。由眼底彩照可(kě)知，大鼠前房灌注維持4h0-7天眼底血管未見明顯變化，眼底顔色變白14d-28d視盤變凸，眼底血管變細變白呈，視網膜顔色從紅潤到白色驟變,屈光介質(zhì)模糊不清。
SD大鼠通過生理(lǐ)鹽水維持前房高眼壓緻青光眼模型可(kě)作(zuò)為(wèi)該發病藥理(lǐ)研究較好的疾病動物(wù)模型。
OCT7d時視網膜外核層小(xiǎo)時變薄，各層界限模糊14d-28d外核層随時間變化變薄的同事内界膜到内核層也逐漸變薄，斷層清晰度也逐漸降低。
由眼底彩照可(kě)知，大鼠前房灌注維持4h0-7天眼底血管未見明顯變化，眼底顔色變白。14d-28d視盤變凸，眼底血管變細變白呈，視網膜顔色從紅潤到白色驟變,屈光介質(zhì)模糊不清。
七、STZ藥物(wù)誘導視網膜糖尿病模型
本研究旨在對鏈脲佐菌素(STZ)誘導的糖尿病大鼠視網膜病變糖尿病進行眼底變化評價。
雄性 SD 大鼠 75 隻，随機分(fēn)為(wèi)空白組(30 隻)和糖尿病組(45 隻) 。采 用(yòng)次 性大劑量 腹 腔 注 射 STZ60 mg/kg 的方法制備糖尿病模型 應用(yòng)眼科(kē)超顯微成像系統和視網膜成像系統、視覺電(diàn)生理(lǐ)儀進行眼底彩照、熒光素鈉血管造影(FFA)、OCT檢測、ERG檢查。
OCT正常組、模型組早期視網膜結構清晰、完整各層界限清楚未見有(yǒu)層次缺失。但是随着生長(cháng)周期延長(cháng)，大鼠眼睛出現白内障情況，OCT視網膜斷層結構模糊甚至出現斷層信息不顯影情況。眼底彩照及FFA早期未見明顯區(qū)别，但是随着生長(cháng)周期延長(cháng)，大鼠眼睛出現白内障情況，眼底彩照及FFA出現不顯影情況。
鏈脲佐菌素(STZ)誘導的糖尿病大鼠視網膜病變檢測形态學(xué)指标無明顯差異，但是血糖及其他(tā)指标符合該病症也可(kě)作(zuò)為(wèi)該現象發病機制研究較好的疾病動物(wù)模型。
OCT正常組、模型組早期視網膜結構清晰、完整各層界限清楚未見有(yǒu)層次缺失。但是随着生長(cháng)周期延長(cháng)，大鼠眼睛出現白内障情況，OCT視網膜斷層結構模糊甚至出現斷層信息不顯影情況
眼底彩照及FFA早期未見明顯區(qū)别，但是随着生長(cháng)周期延長(cháng)，大鼠眼睛出現白内障情況，眼底彩照及FFA出現不顯影情況。
采用(yòng)彌散光照明法早期正常組和模型組眼表及晶體(tǐ)未發現明顯異常，随着模型生長(cháng)周期，模型加重可(kě)以看到正常組虹膜結構清晰完整，散瞳後屈光介質(zhì)透徹，模型組出現晶體(tǐ)白裂狀況，屈光介質(zhì)渾濁甚至白裂。
八、中(zhōng)心性漿液性視網膜脈絡膜模型
采用(yòng)兔耳緣靜脈注射腎上腺素的方法建立中(zhōng)心性漿液性脈絡膜視網膜病變(CSC)動物(wù)模型,為(wèi)CSC發病機制和防治研究提供動物(wù)模型。
分(fēn)别選取雄性青紫藍免10隻,采用(yòng)耳緣靜脈注射熒光素鈉法行熒光素眼底血管造影(FFA),排除眼底血管病變.青紫藍兔均每天經耳緣靜脈注射腎上素0.04mg/kg.實驗兔每周行FFA,分(fēn)别于注射後4、8和12周采用(yòng)OCT觀察實驗免視網膜組織結構。
10隻青紫藍兔在注射後8周内共有(yǒu)7隻眼出現眼底熒光素滲漏、RPE脫色素、局部視網膜神經上皮層脫離。
靜脈注射腎上腺素在有(yǒu)色兔可(kě)誘導出CSC樣病變,而在白化兔上無法誘導出CSC樣病變。
OCT正常組視網膜結構清晰、完整各層界限清楚未見有(yǒu)層次缺失,脈絡膜位置未出現病變特征。模型組視網膜結構不清晰、完整各層界限較模糊清,脈絡膜位置出現層次隆起、水腫等病變特征。
九、基因型糖尿病視網膜病變模型
使用(yòng)視網膜成像系統觀察ZDF糖尿病模型眼底變化。
購(gòu)買維持糖尿病模型症狀1個月雄性ZDF大鼠6隻，3隻糖尿病組、3隻對照組SPF級，體(tǐ)質(zhì)200+20g，周齡7-8周。
使用(yòng)視網膜成像系統采用(yòng)眼底彩照及FFA功能(néng)分(fēn)别活體(tǐ)、連續觀察1個月、1個半月、2個月周期，檢測眼底彩照及FFA熒光造影變化。
眼底彩照及FFA熒光造影變化
糖尿病組與正常組對比眼底彩照未發現明顯異常，糖尿病組遠(yuǎn)離視盤部分(fēn)區(qū)域有(yǒu)點狀高亮度、白色絮狀熒光現象，正常組正常。FFA造影顯示糖尿病組1個月、1個半月眼底有(yǒu)點狀，棉絮狀熒光堆積滲漏，2個月後出現大面積熒光滲漏，但正常組眼底未見明顯滲漏區(qū)域。
視網膜成像系統能(néng)明顯的觀察ZDF大鼠糖尿病視網膜病變模型眼底的變化，且ZDF鼠模型可(kě)作(zuò)為(wèi)研究糖尿病視網膜病變研究的動物(wù)模型。
糖尿病組與正常組對比眼底彩照未發現明顯異常，但是糖尿病組遠(yuǎn)離視盤部分(fēn)區(qū)域有(yǒu)點狀高亮度、白色絮狀熒光現象（如紅色箭頭），正常組未發現。FFA熒光造影顯示糖尿病組1個月和1個半月出現有(yǒu)點狀，棉絮狀熒光堆積滲漏（如黃色箭頭），2個月眼底出現大面積熒光滲漏（如黑色箭頭），但正常組眼底未見明顯滲漏區(qū)域。
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