Micro-CT在昆蟲研究領域中(zhōng)的應用(yòng)案例
在地球上衆多(duō)的生物(wù)類群中(zhōng),昆蟲種類繁多(duō)、數量巨大、變化豐富,與人類關系密切。人類經濟的發展離不開桑蠶、蜜蜂這類益蟲的促進,但是同時一些蚊繩等害蟲也威脅着人類的生命健康。另外,在仿生學(xué)領域上模仿昆蟲的結構或者功能(néng)來制造一些設備也造福了人類。在這個物(wù)種多(duō)樣的昆蟲世界吸引着人們對它們有(yǒu)着非常多(duō)好奇,讓人們不斷地觀察探究這個昆蟲世界。昆蟲個體(tǐ)小(xiǎo)、外骨骼和内結構精(jīng)細,因此顯微CT在觀察昆蟲時有(yǒu)着不可(kě)替代技(jì )術優勢。CT分(fēn)辨率很(hěn)高,可(kě)以無損地觀察昆蟲,可(kě)以針對昆蟲的不用(yòng)尺度上進行三維結構重建。利用(yòng)這一強大的技(jì )術手段,昆蟲學(xué)家們不僅可(kě)以得到傳統的形态學(xué)和組織切片技(jì )術所不能(néng)得到的各種軟組織的精(jīng)細三維結構,而且還可(kě)以對化石昆蟲、昆蟲的生理(lǐ)過程和内部的形态學(xué)變化進行細緻的觀測和對比研究。
1.1阿拉伯胸蟻
昆蟲學(xué)家會對新(xīn)發現的昆蟲會進行分(fēn)類定義,讓它有(yǒu)屬于自己的獨特ID。DNA條形碼、形态及計量學(xué)和多(duō)種方法相互結合的綜合法等傳統分(fēn)類方法。Micro-CT技(jì )術的出現,讓人們看到了一種全新(xīn)的分(fēn)類方法,這種方法不需要對樣本造成任何損傷,就能(néng)對樣本進行有(yǒu)效的掃描,從而構建出一種真實的昆蟲3D結構。顯微CT的高分(fēn)辨率使得生成的虛拟結構非常精(jīng)細;三維結構的虛拟特性使得虛拟特性更加便捷的交互操作(zuò)、遠(yuǎn)程操作(zuò)。這些特點可(kě)以讓昆蟲學(xué)家們通過遠(yuǎn)程研究虛拟結構來對昆蟲進行研究、分(fēn)類定義。因此,顯微CT在的分(fēn)類學(xué)上有(yǒu)着很(hěn)大的優勢。
阿拉伯斑胸蟻是一種新(xīn)種類,目前昆蟲學(xué)家隻收集了2隻樣本,這是一個非常罕見的數字。當昆蟲學(xué)家對這種螞蟻進行分(fēn)類的時候,他(tā)們已經利用(yòng)Micro-CT對其進行了重新(xīn)構建。下面這張圖展示的是阿拉伯斑胸蟻的3D圖片。
圖 1 (A-H) 阿拉伯斑胸蟻的 3D 模型表面顯示體(tǐ)渲染的靜止圖像 (A) 頭部(包括觸角)的背視圖;(B) 頭背的背視圖;(C) 頭部(包括觸角)的側視圖;(D) 身體(tǐ)的側視圖;(E) 身體(tǐ)的背視圖;(F)軀體(tǐ)和腰段的背視圖;(G) 前肢、腰段和胃的側視圖;(H) 前肢,腰段和胃的背視圖。
1.2 斑馬魚
骨骼是被廣泛研究的一種生物(wù)材料。下圖中(zhōng)使用(yòng)顯微CT和熒光顯微鏡等來檢測斑馬魚幼蟲的骨骼發育。下圖是分(fēn)别用(yòng)顯微CT和熒光顯微鏡對相同使用(yòng)鈣黃綠素染色的斑馬魚标本進行觀察。對17天齡的野生型幼蟲進行Micro-CT掃描,發現其頭蓋骨,基枕,外枕,角腮,牙齒,三對耳石等顱骨元素。前8個椎骨中(zhōng)心及其神經棘和第5個椎骨上的第一根肋骨是可(kě)見的,以及來自韋伯裝(zhuāng)置的一些元素。熒光顯微鏡下可(kě)以觀察到相同的骨頭,但無法觀察到耳石和牙齒。30天時,韋伯式裝(zhuāng)置完全形成,三足、骨盆、牙齒、和耳石清晰可(kě)見。用(yòng)熒光顯微鏡觀察到30天時的完整軸向骨架,但很(hěn)難看到頭蓋骨中(zhōng)的元素如三足、骨盆等。
綜合以上研究成果,實現對骨骼(如耳石)的骨量、礦物(wù)質(zhì)含量的定量分(fēn)析,并對其進行形态學(xué)鑒定。顯微CT成像顯示,軸向骨骼中(zhōng)第一塊骨形之前,有(yǒu)礦化聚焦物(wù)的脊索,在礦物(wù)的存儲中(zhōng)這些結構可(kě)能(néng)會發揮作(zuò)用(yòng)。該研究結果表明高分(fēn)辨率的CT在表征斑馬魚方面的潛力。
圖 2 野生型 (a、b、c、d) 和珍珠層(e、f、g、h)斑馬魚鈣化骨骼結構側視圖。左側為(wèi)用(yòng)顯微 CT 進行掃描、重建的三維結構,右側為(wèi)熒光顯微鏡成像。
在此基礎上,利用(yòng)Micro-CT技(jì )術,可(kě)以對正常斑馬魚的脊椎進行局部及局部的形态學(xué)評估,并可(kě)以測量其在外界壓力下的脊椎角度,從而确定其冠狀位及矢狀位的角度。以下是顯微 CT 成像的初始步驟。
圖 3 (A) 骨窗對于優化骨骼的可(kě)視化至關重要;(B、C) 減去鳍等軟骨結構,以避免它們幹擾脊柱的可(kě)視化;(D) 強調頸椎,以确保橫突起的良好能(néng)見度(白色箭頭); (E) 骨性不良的例子:椎骨模糊,器官仍然可(kě)見(箭頭); (F) 準備在矢狀面進行評估的圖像:眼球排列(箭頭), 每對的肋骨疊加(箭頭),頸椎清晰可(kě)見。
目前,國(guó)内外學(xué)者對Micro-CT三維重構進行多(duō)個評價面,分(fēn)别測定了不同的矢狀面(胸椎和最大後凸曲線(xiàn)及其根尖,脊柱各節段長(cháng)度,矢狀面指數)和冠狀面(科(kē)布角,根尖,内側椎體(tǐ),冠狀面排列,突起側面)的矯形參數。利用(yòng)Micro-CT技(jì )術,對帶有(yǒu)人造誘發曲線(xiàn)的斑馬魚科(kē)布角及根尖椎骨進行了定位。
1.3 螞蟻食道
蟻群能(néng)夠運輸,儲存盒并在食物(wù)中(zhōng)進行營養反應,這在社會生活中(zhōng)是非常重要的。然而,我們并不知道,在蟻群的進化過程中(zhōng),消化系統的構造是怎樣發生變化的。研究者首次利用(yòng)X射線(xiàn)顯微計算機斷層掃描和三維分(fēn)割技(jì )術報道了螞蟻的輔助胸廓作(zuò)物(wù)的存在。下圖顯示了螞蟻的顯微CT二維切片和在顯微CT三維重建的基礎上實現的三維分(fēn)割模型呈現出的螞蟻食道。
圖 4 (A) 主工(gōng)蟻圖像;(B) 副工(gōng)蟻圖像;(C) 主工(gōng)蟻顯微 CT 二維顯示矢狀面;(D) 主工(gōng)蟻顯微 CT 二維顯示橫切面;(E) 副工(gōng)蟻顯微 CT 二維顯示矢狀面;(F) 副工(gōng)蟻顯微 CT 二維顯示橫切面;(G) 主工(gōng)蟻分(fēn)割三維模型中(zhōng)的食道形狀;(H) 副工(gōng)蟻分(fēn)割三維模型中(zhōng)的食道形狀。
昆蟲通過創建不同的構造來适應其所處的環境,其中(zhōng)最具(jù)有(yǒu)代表性的就是螞蟻的巢穴。由于它是動态的,所以我們必須對它的結構進行實時觀測,而Micro-CT正好符合這一要求。
研究人員在此基礎上,利用(yòng)Micro-CT掃描及時序試驗,首次得到蟻巢四維增長(cháng)的高分(fēn)辨資料。在下面的圖片中(zhōng),研究人員設置了3種情況,以使螞蟻在一個含沙罐(63mm的内徑,68mm深)内挖窩和築巢;1個50mm深的沉積物(wù)(0P); 3個構成兩個等間距面(2P)的16.7毫米深沉積層; 5個10mm深的沉積層構成4個等間距的平面(4P)結果表明,在不同的時間、不同的試驗條件下,蟻巢的形态發生了明顯的變化。昆蟲通過創建不同的構造來适應其所處的環境,其中(zhōng)最具(jù)有(yǒu)代表性的就是螞蟻的巢穴。由于它是動态的,所以我們必須對它的結構進行實時觀測,而Micro-CT正好符合這一要求。
研究者在顯維CT三維重建上定義了幾個評估平面,以測量矢狀面(胸椎和最大後凸曲線(xiàn)及其根尖、脊柱各段長(cháng)度、矢狀指數)和冠狀面(科(kē)布角、根尖、内椎骨)
圖5 不同實驗條件下,來自同一供體(tǐ)群體(tǐ)的四維螞蟻築巢。(a)0P條件下的群體(tǐ),螞蟻在24小(xiǎo)時内達到實驗容器的邊緣和底部。(b)2P條件下的群提體(tǐ),蟻巢18小(xiǎo)時已到達實驗容器的邊緣。(c)4P條件下的群體(tǐ),蟻巢24小(xiǎo)時已到達實驗容器的邊緣。
昆蟲學(xué)家經常從化石中(zhōng)探尋關于昆蟲的奧秘:遠(yuǎn)古的昆蟲是什麽樣的?又(yòu)與某些植物(wù)有(yǒu)何聯系?他(tā)們的s生存環境如何?無破環的Micro-CT技(jì )術是一種很(hěn)好的手段,可(kě)以用(yòng)來研究化石的内部構造。
已有(yǒu)研究表明,被子植物(wù)與其昆蟲傳粉昆蟲間具(jù)有(yǒu)基本的共生性。對于白垩紀時期的研究主要是通過Micro-CT技(jì )術獲得的,利用(yòng)Micro-CT技(jì )術,我們在黃蜂化石中(zhōng)發現了大量的花(huā)粒,并在口部發現了大量花(huā)粉粒,這些證據清楚地說明了黃蜂以花(huā)粉為(wèi)食。
圖 6 黃蜂化石頭部的高分(fēn)辨率顯微 CT 掃描(正面視圖)。左側為(wèi)外表面,右側為(wèi)外表面褪色後圖像,綠色部分(fēn)為(wèi)口腔内的食物(wù)團。
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